皮膚細(xì)胞培育技術(shù)可模擬人體內(nèi)的生理環(huán)境，研討細(xì)胞與細(xì)胞之間的反響，細(xì)胞與間質(zhì)之間的反響等，具有快速、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)，既可用來毒性剖析，也可停止成效評價，是保證化裝品平安、有效的必要手腕，為皮膚生理學(xué)等提供了技術(shù)基礎(chǔ)。

一、人永生化角質(zhì)細(xì)胞（Human immortalized keratinocytes，HaCaT 細(xì)胞）

角質(zhì)構(gòu)成細(xì)胞（KC）的體外培育技術(shù)曾經(jīng)十分成熟，其生長較快、細(xì)胞存活率較高，但也易老化且傳代次數(shù)較少，所以在化裝品成效評價中通常會運(yùn)用HaCaT細(xì)胞（即非腫瘤來源的永生化人正常皮膚的KC株，與KC分化特性相似，具有易于培育、傳代次數(shù)多的優(yōu)點(diǎn)）。

1、HaCaT細(xì)胞運(yùn)用于保濕成效評價

HaCaT細(xì)胞可分解透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）、水通道蛋白（Aquaporin，AQP）、嚴(yán)密銜接蛋白（Tightjunction protein，TJP）以及絲聚蛋白（Filaggrin，F(xiàn)LG）等與皮膚保濕相關(guān)的生物分子。因此，可以經(jīng)過檢測化裝品原料對HaCaT細(xì)胞中AQP、claudin-1（claudin-1是TJP中構(gòu)成表皮細(xì)胞旁屏障的主要跨膜蛋白）和FLG等保濕相關(guān)蛋白含量的影響來反映其保濕才干，對保濕化裝品停止成效評價。

不過如今停止保濕成效測試普通會經(jīng)過人體實(shí)驗(yàn)的方法，這樣更直觀一些，HaCaT細(xì)胞測試可用于研討原料的保濕機(jī)理。

2、HaCaT細(xì)胞運(yùn)用于抗氧化成效評價

活性氧（ROS）過量會對DNA和蛋白質(zhì)發(fā)生氧化損傷；丙二醛（MDA）是生物體內(nèi)自在基作用于脂質(zhì)發(fā)作過氧化反響的終產(chǎn)物。因此，經(jīng)過檢測其中HaCaT細(xì)胞內(nèi)ROS和MDA的含質(zhì)變化可反映出細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的水平， 評價化裝品原料的抗氧化才干。

超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPX）可用于用于肅清或降低氧自在基形成的損傷。因此，經(jīng)過檢測SOD、CAT和GSHPX的生機(jī)，可反映化裝品原料對HaCaT細(xì)胞內(nèi)自在基的肅清才干的影響，以此來評價化裝品原料的抗氧化才干。

例如，王茵等人經(jīng)過測量小鼠肝臟組織的抗氧化酶系統(tǒng)活性（SOD，GSHPX，AOC（總抗氧化才干），MDA，NO（一氧化氮））來研討蝦青素的抗氧化效果。*終結(jié)果顯示蝦青素可提高小鼠肝臟和血液中的SOD，GSHPX，AOC等活性目的，降低MDA和NO的濃度，即蝦青素具有抗氧化才干。

二、小鼠B-16黑色素瘤細(xì)胞（簡稱B-16細(xì)胞）

黑素細(xì)胞（Melanocyte，MC）是皮膚內(nèi)的一種特殊細(xì)胞，它位于表皮的基底層，細(xì)胞內(nèi)的黑素小體（Melanosomes）能分解黑色素（Melanin），并轉(zhuǎn)移到周圍的角質(zhì)構(gòu)成細(xì)胞中，為皮膚提供顏色。但是黑素細(xì)胞的增殖比擬緩慢，所以常用B-16細(xì)胞替代黑素細(xì)胞停止細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。（B-16細(xì)胞在基本結(jié)構(gòu)與黑色素分解功用方面與人黑素細(xì)胞基本相反，且增殖才干更強(qiáng)，可以屢次傳代，適宜用于實(shí)驗(yàn)研討）。

B-16細(xì)胞可運(yùn)用于美白成效評價，例如馬佳等研討了壬二酸對人表皮黑素細(xì)胞和鼠黑素瘤B16細(xì)胞黑素分解的影響。與空白對照組比擬? 0.1 mmol//L壬二酸即顯示抑制人表皮黑素細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素的分解，同等濃度的壬二酸對鼠黑素瘤B16細(xì)胞的酪氨酸酶活性和黑素分解也有抑制造用。

三、人皮膚成纖維細(xì)胞（Human skin fibroblast，HSF）

HSF是皮膚真皮層中*主要的細(xì)胞，關(guān)于維持皮膚的彈性和張力具有重要的作用。HSF具有很強(qiáng)的蛋白質(zhì)分解才干，可以分解并分泌少量彈性蛋白、膠原蛋白、糖胺多糖和糖蛋白等基質(zhì)成分，進(jìn)而生成彈性纖維、膠原纖維和網(wǎng)狀纖維，分泌多種細(xì)胞修復(fù)因子，使得皮膚具有弱小的更新與自我修復(fù)才干。

人皮膚成纖維細(xì)胞可運(yùn)用于抗衰老成效評價，例如鄭雯等研討了白藜蘆醇對UVB照射的人皮膚成纖維細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-1）水平及細(xì)胞凋亡的影響，即白藜蘆醇對紫外線照射皮膚的光維護(hù)作用。結(jié)果標(biāo)明白藜蘆醇能經(jīng)過抑制UVB照射所形成的人皮膚成纖維細(xì)胞MMP-1水平增長，使皮膚真皮組織膠原蛋白的分解增加，從而延緩紫外線照射對皮膚形成的損傷和老化進(jìn)程。

四、人角質(zhì)構(gòu)成細(xì)胞（HKC）

人角質(zhì)構(gòu)成細(xì)胞系一種能分解角質(zhì)蛋白的上皮細(xì)胞。此類細(xì)胞為表皮的主體，由表皮深層始逐漸增殖、分化，并不時向表層移行，其間可分紅幾個層次，表皮*深層為基底層，向上依次為棘層、顆粒層、角質(zhì)層，角質(zhì)蛋白亦依生長層次逐漸分解。

人角質(zhì)構(gòu)成細(xì)胞是表皮中*重要的細(xì)胞之一，它可以反映表皮的安康形狀，所以也有少量的研討人員將它運(yùn)用于化裝品原料的研討與運(yùn)用，例如王剛等經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明阿魏酸是經(jīng)過影響HKC下游炎癥因子如TNF-α和IL-8分泌，從而參與調(diào)理免疫反響的信號傳導(dǎo)機(jī)制，到達(dá)對HKC的維護(hù)作用。

END

參考資料：

[1] 郭立群. 化裝品成效評價(Ⅶ)-細(xì)胞生物學(xué)在化裝品成效評價中的運(yùn)用. 日用化學(xué)工業(yè). 2018.

[2] 馬宇晨. 用于化裝品成效評價的皮膚細(xì)胞類型、特點(diǎn)及運(yùn)用概略. 日用化學(xué)工業(yè). 2021.

[3] 關(guān)英杰. 皮膚細(xì)胞培育技術(shù)在化裝品成效研討中的運(yùn)用. 日用化學(xué)工業(yè). 2002.

[4] 王茵. 自然蝦青素的抗疲勞及抗氧化作用研討. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然迷信版）. 2015.

[5] 馬佳. 壬二酸對人黑素細(xì)胞和鼠黑素瘤B16細(xì)胞黑素分解功用的影響. 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2006.

[6] 鄭雯. 白藜蘆醇對UVB照射的人皮膚成纖維細(xì)胞MMP-1水平及細(xì)胞凋亡的影響. 中國皮膚性病學(xué)雜志. 2012.

[7] 王剛. 阿魏酸對人角質(zhì)構(gòu)成細(xì)胞的維護(hù)作用. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2011.

《化裝品成效宣稱評價指點(diǎn)準(zhǔn)繩》

起草說明

為規(guī)范和指點(diǎn)我國化裝品成效宣稱的評價任務(wù)，配合《化裝品監(jiān)視管理?xiàng)l例》的實(shí)施，國度藥品監(jiān)視管理局組織起草了《化裝品成效宣稱評價指點(diǎn)準(zhǔn)繩》（征求意見稿）（以下簡稱“指點(diǎn)準(zhǔn)繩”）?，F(xiàn)就起草任務(wù)的有關(guān)狀況說明如下：

一、必要性

依據(jù)《化裝品監(jiān)視管理?xiàng)l例》第二十二條的要求，化裝品的成效宣稱應(yīng)當(dāng)有充沛的迷信依據(jù)，且化裝品注冊人、備案人應(yīng)當(dāng)在國務(wù)院藥品監(jiān)視管理部門規(guī)則的專門網(wǎng)站發(fā)布成效宣稱依據(jù)的相關(guān)資料，接受社會監(jiān)視。目前，除防曬及防曬產(chǎn)品的防水成效需求依據(jù)《化裝品平安技術(shù)規(guī)范》的要求停止成效評價外，并未對其他化裝品成效宣稱提出要求。

為保證消費(fèi)者的合法權(quán)益，規(guī)范行業(yè)行為和促停止業(yè)安康開展，經(jīng)過對現(xiàn)有化裝品成效宣稱評價體系、國際外評價方法及評價部門/機(jī)構(gòu)的調(diào)研剖析，結(jié)合我國化裝品法規(guī)要求及行業(yè)實(shí)踐狀況，起草本指點(diǎn)準(zhǔn)繩，為化裝品成效宣稱評價任務(wù)提供指點(diǎn)依據(jù)。

二、主要內(nèi)容

（一）堅(jiān)持迷信性和可行性。普遍參考?xì)W、美、日、韓相關(guān)法規(guī)、行業(yè)/學(xué)術(shù)組織發(fā)布的成效宣稱評價方法和文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，充沛結(jié)合我國行業(yè)現(xiàn)狀，對化裝品成效宣稱評價的內(nèi)容、范圍、責(zé)任主體、總體準(zhǔn)繩、方法選擇和機(jī)構(gòu)選擇等提出基本要求。

（二）堅(jiān)持行業(yè)自律及規(guī)范性。規(guī)則化裝品注冊人、備案人應(yīng)當(dāng)實(shí)行其主體責(zé)任，在國度藥品監(jiān)視管理局規(guī)則的網(wǎng)站向社會地下化裝品成效宣稱依據(jù)的摘要，經(jīng)過社會監(jiān)視的方式，而不是行政審批來處置成效宣稱的真實(shí)性效果。

三、需求重點(diǎn)說明的效果

（一）關(guān)于成效宣稱評價范圍。依據(jù)國際外對成效化裝品的分類和我國《化裝品分類規(guī)則和分類目錄》（征求意見稿）中的成效宣稱分類用語，對比研討后發(fā)現(xiàn)“防脫發(fā)、防曬、祛痘”等化裝品的運(yùn)用風(fēng)險(xiǎn)較高，上述幾類產(chǎn)品有的在美國作為“OTC藥品”；或在日本作為“醫(yī)藥部外品”；或在韓國作為“醫(yī)藥外品”嚴(yán)厲管理?！吨更c(diǎn)準(zhǔn)繩》規(guī)則了化裝品成效宣稱評價準(zhǔn)繩，消費(fèi)者可經(jīng)過感官識別的，或產(chǎn)品經(jīng)過物理作用發(fā)失效果且在標(biāo)簽中明示的，可豁免提交成效宣稱評價資料。

（二）關(guān)于成效宣稱評價機(jī)構(gòu)?；b品成效宣稱評價的責(zé)任主體為化裝品的注冊人、備案人，可自行或委托具有相應(yīng)才干的評價機(jī)構(gòu)承當(dāng)成效宣稱的評價任務(wù)。防曬、祛斑美白、防脫發(fā)和新成效應(yīng)委托化裝品注冊備案檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)評價和方法驗(yàn)證。

（三）關(guān)于成效宣稱評價方法。評價方法可選用國際外相關(guān)法規(guī)、規(guī)范、規(guī)范規(guī)則的方法，威望組織或技術(shù)機(jī)構(gòu)及行業(yè)協(xié)會指南、專業(yè)學(xué)術(shù)雜志地下宣布方法等，也可運(yùn)用閱歷證的實(shí)驗(yàn)室自擬方法。同一成效宣稱有多種可選擇的評價方法時，應(yīng)優(yōu)先選擇我國現(xiàn)行法律法規(guī)、國度規(guī)范或技術(shù)規(guī)范中的方法。防曬、祛斑美白、防脫發(fā)成效宣稱評價選擇《化裝品平安技術(shù)規(guī)范》以外的方法時，需停止方法驗(yàn)證。

（四）關(guān)于祛斑美白成效評價交叉參照。思索到我國的行業(yè)現(xiàn)狀，在調(diào)研了祛斑美白成效作用機(jī)制、影響成效發(fā)揚(yáng)的主要要素及祛斑美白成效評價方法的基礎(chǔ)上，參考防曬化裝品管理閱歷，對祛斑美白成效評價交叉參照提出準(zhǔn)繩性要求。

（信息來源：化裝品檢定所；編發(fā)：北京天健華成國際投資顧問有限公司化裝品注冊部 http://www.zhuceabc.cn）