到目前為止，已經(jīng)報(bào)道有2種非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動(dòng)物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動(dòng)物模型用于實(shí)驗(yàn)研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進(jìn)行定位感染，動(dòng)物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長(zhǎng)，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動(dòng)物模型，缺點(diǎn)是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測(cè)試劑。小鼠對(duì)多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動(dòng)物模型，不僅有完備的檢測(cè)試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機(jī)制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測(cè)到血清抗體陽性，并推測(cè)猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對(duì)流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機(jī)制不僅與巨噬細(xì)胞有關(guān)，在研究抗補(bǔ)體機(jī)制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號(hào)途徑的作用，這些研究在非人靈長(zhǎng)類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補(bǔ)體機(jī)制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細(xì)胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細(xì)支氣管上皮上。在終端呼吸性細(xì)支氣管上皮細(xì)胞也表達(dá)α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細(xì)支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細(xì)支氣管細(xì)胞上，部分肺泡壁細(xì)胞表達(dá)這種受體，這種細(xì)胞為肺泡Ⅱ型細(xì)胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細(xì)胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細(xì)胞既表達(dá)α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達(dá)α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認(rèn)為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對(duì)小鼠的致病力和復(fù)制能力。

3)有研究顯示通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)非洲綠猴上皮細(xì)胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細(xì)胞的結(jié)合能力接近。缺乏實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進(jìn)行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會(huì)出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細(xì)胞中復(fù)制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復(fù)制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴(yán)重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動(dòng)物研究中心完成，該中心具有符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動(dòng)物的繁殖及感染模型評(píng)估在中國(guó)疾控中心動(dòng)物中心完成，所有操作在SFP級(jí)別下遵守二級(jí)生物安全管理規(guī)定進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物尸體實(shí)行無害化處理，對(duì)生態(tài)環(huán)境無影響。

1.小鼠模型感染后臨床癥狀變化

小鼠感染H7N9病毒后的存活情況如圖1A所示，其中接種106 TCID50病毒的小鼠14天內(nèi)全部存活，而107或108 TCID50病毒對(duì)小鼠的致死率分別達(dá)20%和60%。小鼠感染106 TCID50病毒后，第2天開始出現(xiàn)體重下降的現(xiàn)象，第9天體重降至最低，僅為攻毒前的71.1%，隨后體重便逐漸上升直至完全恢復(fù)（圖1B及表1）。此外，部分小鼠感染后第3天開始出現(xiàn)豎毛現(xiàn)象，第4天時(shí)所有小鼠均出現(xiàn)并持續(xù)至感染后第14天（圖2及表1）。

出現(xiàn)該臨床表現(xiàn)的動(dòng)物數(shù)量占總觀察數(shù)量的比例。

2. 小鼠模型感染后病毒在組織中復(fù)制情況

接種106 TCID50病毒的小鼠在感染后1，2，3，5，7天各安樂解剖6只，來分析病毒的組織分布。從感染后第1天至第7天，小鼠的支氣管肺泡灌洗液（BALF）及肺組織均可檢測(cè)到排毒，其中BALF排毒的峰值出現(xiàn)在感染后第1天（103.75 TCID50/ml），而肺組織的排毒峰值出現(xiàn)在感染后第2天（105.69 TCID50/g）（圖3及表2）。除呼吸道外，病毒還可從小鼠的腦、肝、脾、腎、和小腸中檢出（表2）。

病毒檢測(cè)陽性的動(dòng)物數(shù)量占總解剖動(dòng)物數(shù)量的比例。

3.小鼠模型感染后組織病理損傷

免疫組織化學(xué)（IHC）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)病毒抗原主要分布于肺支氣管上皮細(xì)胞、腦脈絡(luò)叢、小腸絨毛柱形細(xì)胞、以及腎小管內(nèi)（圖4 (i-iv)）。H-E染色結(jié)果證實(shí)從感染后第1天起，肺組織即呈現(xiàn)出典型的流感病毒感染的病理表現(xiàn)，包括炎性充血和滲出性病理改變等等。感染后3-7天，肺組織病變面積進(jìn)一步擴(kuò)大，并發(fā)展為重度間質(zhì)性肺炎（圖4 (v-viii)）。

4. 小鼠模型感染后血清特異性抗體產(chǎn)生情況

感染后第14天，對(duì)存活小鼠的眼眶靜脈叢血清進(jìn)行血凝抑制實(shí)驗(yàn)（HI），測(cè)定對(duì)H7N9病毒的特異性抗體效價(jià)，結(jié)果證實(shí)所有小鼠均出現(xiàn)抗血清轉(zhuǎn)陽，對(duì)H7N9病毒的HI效價(jià)達(dá)80-160。

5. 小鼠模型感染后血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果

臨床研究證實(shí)，患者感染H7N9病毒后，會(huì)出現(xiàn)顯著的白血球減少癥。在小鼠模型中，我們同樣觀察到這一現(xiàn)象。與小鼠感染前相比，接種H7N9病毒后第2-7天，小鼠的白細(xì)胞總數(shù)出現(xiàn)了顯著下降（P<0.05）。感染后第2天，還可見顯著降低的淋巴細(xì)胞和顯著升高的中性粒細(xì)胞（P<0.05）（表3）。

白細(xì)胞總數(shù)，表示為每微升外周血中103 白細(xì)胞數(shù)量。

小鼠由于繁殖周期短、遺傳背景均一、個(gè)體差異小等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用作流感病毒研究的動(dòng)物模型，不僅有完備的檢測(cè)試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機(jī)制方面的研究。小鼠多表達(dá)禽源流感病毒α2,3SA受體，人源流感病毒α2,6SA受體較少，曾局限的認(rèn)為小鼠較適合用于α2,3SA受體結(jié)合的流感病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對(duì)小鼠的致病力和復(fù)制能力。

制作流感病毒感染動(dòng)物模型多應(yīng)用SPF級(jí)雌性BALB/c小鼠，4-6周齡。

病毒株為A/Anhui/1/2013 (H7N9)，BALB/c小鼠經(jīng)過輕度麻醉后滴鼻感染病毒。小鼠感染后觀察14天，監(jiān)測(cè)存活率及體重變化率。感染后分時(shí)間段安樂小鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集相同數(shù)量小鼠肺、脾、腦、心等組織，進(jìn)行病毒滴度測(cè)定和組織病理學(xué)檢查。

2013 年3月31日，依據(jù)《國(guó)際衛(wèi)生條例（2005）》，中國(guó)政府報(bào)告上海和安徽發(fā)現(xiàn)3例人感染新型甲型H7N9禽流感病毒（以下簡(jiǎn)稱H7N9）病例。在隨后的幾個(gè)月內(nèi)，以華東地區(qū)為代表的我國(guó)多個(gè)省市陸續(xù)確診并報(bào)道多例H7N9禽流感病毒感染人造成重癥肺炎甚至死亡的病例，這是世界首次發(fā)現(xiàn)的新型重配H7N9禽流感病毒所致的人感染疫情，引起了廣泛關(guān)注。

H7N9禽流感病毒是由H7 的HA 基因，N9 的NA 基因以及H9N2 病毒的6 個(gè)內(nèi)部基因片段重配而成的新型病毒。對(duì)目前已公布了全基因組的若干H7N9禽流感患者分離株的序列分析結(jié)果顯示，該病毒具有與之前其他亞型甲型流感病毒類似的遺傳特征，包括對(duì)禽類低致病性，感染哺乳動(dòng)物的能力增強(qiáng)，對(duì)金剛烷胺類抗病毒藥物耐藥，以及對(duì)神經(jīng)氨酸酶抑制劑（如奧司他韋和扎那米韋）敏感。

人感染H7N9禽流感病毒后，臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、乏力、肌肉酸痛、咯血及胃腸道癥狀，初始癥狀并不包括鼻塞和流涕。97%的患者出現(xiàn)肺炎，超過70%的患者發(fā)生急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS），部分患者繼而進(jìn)展為頑固性低氧血癥和多器官功能衰竭并導(dǎo)致最終死亡。少數(shù)病例為輕癥，均為兒童，常常僅有發(fā)熱表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果顯示，患者外周血白細(xì)胞正?；驕p少，淋巴細(xì)胞減少，血小板缺乏，以及肝酶輕度升高。約60%的病例具有各種并發(fā)癥，如冠心病、糖尿病、高血壓和慢性阻塞性肺病。病例以老年人（平均年齡62歲）和男性（69%）居多。

研究顯示，活禽市場(chǎng)是人感染H7N9 禽流感病毒的可能來源?；钋荼┞妒侨烁腥镜年P(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)因素，導(dǎo)致患者感染的主要暴露方式為直接接觸染毒的活禽、被其排泄物污染的環(huán)境或物品。然而，目前從不同患者體內(nèi)分離到的病毒株基因組序列存在一定的差異，其進(jìn)化源頭似乎并不相同，因此目前報(bào)道的這些病例極有可能是一些獨(dú)立的感染事件。流行病學(xué)調(diào)查也為這一論點(diǎn)提供了部分佐證。目前已確診的人感染病例多為散發(fā)，彼此間沒有明顯的流行病學(xué)關(guān)聯(lián)。盡管如此，目前仍有三起疑似家庭聚集案例的報(bào)道。

基因進(jìn)化分析顯示，H7N9 禽流感病毒是一種新型重配病毒。雖然各基因片段分別與近期東亞地區(qū)流行的禽流感病毒同源性較高，但這種基因組成之前從未在禽、人或其他動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)過。其HA 基因可能源于我國(guó)長(zhǎng)三角地區(qū)鴨群中的H7 亞型禽流感病毒，NA基因的來源目前尚無定論，早期研究認(rèn)為其源于歐亞遷徙的候鳥，最新研究則指出它與2010-2011年間途徑香港境內(nèi)的候鳥分離到的H11N9和H2N9病毒高度同源。盡管如此，目前無異議的一致的結(jié)論是，野鳥在H7N9 禽流感病毒傳播中可能扮演重要角色，鴨群則在將H7N9相關(guān)病毒從野鳥傳至家禽的過程中，起到至關(guān)重要的中間宿主作用。